免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
碳瓊脂基礎(chǔ) (CM0119)柚皮苷5-基吲哚P19ARF  p19ARF抑癌基因抗原

胰蛋白胨葡萄糖提取物瓊脂 (CM0127)柚皮素5-基吲哚phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) peptide  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗原

Tryptone Soya Broth（Soybean Casein Digest Medium USP）胰蛋白胨大豆肉湯原花青素6-基吲哚MKK3(MAP Kinase Kinase 3)  絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗原

Tryptone Soya Agar 胰蛋白胨大豆瓊脂現(xiàn)貨巖白菜素6-基吲哚P53(wt-p53)  腫瘤抑制基因抗原（野生型P53）

乳糖肉湯 (CM0137)鹽酸青藤堿6-基吲哚Mtp53(Muta type p53)  突變型P53抗原

馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (CM0139)鹽酸小檗堿（黃連素）3-溴-5-硝基吡啶WIG-1(wtp53-induced gene 1)  野生型p53誘導(dǎo)基因1抗原

110號(hào)葡萄球菌培養(yǎng)基 (CM0145)黃連堿3-溴-5-硝基吡啶P73 protein  P73腫瘤抑制基因抗原

沙保氏液體培養(yǎng)基 (CM0147)鹽酸黃連堿5-溴-2-羥基-3-硝基吡啶p70 S6 Kinase/P70 Beta1  p70S6Kb抗原

Mouse YERSINIA PESTIS Monoclonal body /FITC  熒光素標(biāo)記鼠抗鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克隆IgG緊密連接蛋白2三乙基二磷酸酯Porcine LP-a (Lipoprotein a) 檢測試劑盒

Mouse IgA/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗小鼠IgA緊密連接蛋白71-Boc-2-氨甲基哌啶Porcine SCFR/c-Kit (Stem Cell Factor Receptor) 檢測試劑盒

MPO /FITC  熒光素標(biāo)記髓過氧化物酶IgG2號(hào)染色體開放閱讀框531-Boc-2-氨甲基哌啶Porcine DCN (Decorin) 檢測試劑盒

HAVCR1/KIM1/TIM1/FITC  熒光素標(biāo)記甲型肝炎病細(xì)胞受體1IgG2號(hào)染色體開放閱讀框541-Boc-2-氨甲基哌啶Porcine CLDN11 (Claudin 11) 檢測試劑盒

HSD11B2/HSD2 /FITC  熒光素標(biāo)記羥基類固脫氫酶11β2IgG2號(hào)染色體開放閱讀框565-甲氧基-2-巰基并咪唑Porcine DKK4 (Dickkopf Related Protein 4) 檢測試劑盒

MR/FITC  熒光素標(biāo)記鹽皮質(zhì)激素受體IgG2號(hào)染色體開放閱讀框615-甲氧基-2-巰基并咪唑Porcine S100A8 (S100 Calcium Binding Protein A8/Calgranulin A) 檢測試劑盒

MRAS/Mras/FITC  熒光素標(biāo)記原癌基因M-rasIgG癌相關(guān)抗原5-甲氧基-2-巰基并咪唑Porcine Slit2 (Slit Homolog 2) 檢測試劑盒

Mre11/HNGS1/FITC  熒光素標(biāo)記DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11IgG細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白4腺苷2′:3′-循環(huán)磷酸鹽Porcine PTHrP (Parathyroid Hormone Related Protein) 檢測試劑盒
3號(hào)染色體開放閱讀框32抗體枯草芽孢桿Rat C3a (Compleme Compone  3a)  Kit

卡利比克畢赤酵母Rat C4a (Compleme Compone  4a)  Kit

長根菇Rat C5a (Compleme Compone  5a)  Kit

榨菜檸檬球Rat CTGF (Connective Tissue Growth Factor)  Kit

粘紅酵母Rat CX26 (Connexin 26)  Kit

天藍(lán)色鏈霉*Rat CX31 (Connexin 31)  Kit

草酸鹽貪銅Rat CX37 (Connexin 37)  Kit

梭Rat CX40 (Connexin 40)  Kit