TNF-a酶聯(lián)免疫試劑盒試劑盒的組成

    96/48微孔板(1塊,已包被抗小鼠TNF-a單抗)、樣品稀釋液(1瓶)、抗體工作液(1瓶)、酶標(biāo)抗體工作液(1瓶)、底物稀釋液(1瓶)、終止液(1瓶)、洗滌液(20×,1瓶)、標(biāo)準(zhǔn)品(2000 pg/ml,2管,凍干粉)、OPD片(3片)、坐標(biāo)紙(1張)。

操作步驟

1、設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)孔8孔(根據(jù)樣品蛋白濃度可調(diào)整為6孔),每孔中先各加入樣品稀釋液100 ul,孔再加標(biāo)準(zhǔn)品100 ul,混勻后用移液器吸出100 ul,移至第二孔,如此反復(fù)作對倍稀釋至第7孔,后,從第7孔中吸出100 ul棄去,使之體積均為100 ul。第8孔為空白對照。

2、加樣:待測樣品孔中每孔各加入待測樣品100ul。

3、將反應(yīng)板置于37 ℃×120 min。

4、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上扣干。

5、每孔中加入抗體工作液50ul。

6、將反應(yīng)板充分混勻后置37 ℃×60 min。

7、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。

8、每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。

9、將反應(yīng)板置于37 ℃ 120 min。

10、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。

11、每孔中加入底物工作液100ul, 置于37 ℃暗處反應(yīng)5~10 min。

12、每孔中加入50ul終止液混勻。

13、用酶標(biāo)儀在492 nm處測吸光值。