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科普PCR技術(shù)實驗原理

時間:2021/12/21閱讀:411
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PCR技術(shù),即聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學獎)建立的。這項技術(shù)可在試管內(nèi)的經(jīng)數(shù)小時反應(yīng)就將特定的DNA段擴增數(shù)百萬倍,這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術(shù)在分子生物學研究中具有舉足輕重的意義,極大地推動了生命科學的研究進展。它不僅是DNA分析* 常用的技術(shù),而且在DNA重組與表達、基因結(jié)構(gòu)分析和功能檢測中具有重要的應(yīng)用價值。


PCR可以被認為是與發(fā)生在細胞內(nèi)的DNA復制過程相似的技術(shù),其結(jié)果都是以原來的DNA為模板產(chǎn)生新的互補DNA 段。細胞中DNA的復制是一個非常復雜的過程。參與復制的有多種因素。PCR是在試管中進行的DNA復制反應(yīng),基本原理與細胞內(nèi)DNA復制相似,但反應(yīng)體系相對較簡單。


PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)做準備;


②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;


③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。


重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈",而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。


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