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ELISA包被抗原具體過程方法

時(shí)間:2021/11/29閱讀:615
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具體過程:

1、用50mM的碳酸鹽包被緩沖液 ( pH9.6) 溶解抗原, 使抗原濃度為10-20μg/ml,加 100μl/孔到96孔酶標(biāo)板, 4 ℃放置過夜。

2、第二天棄去包被液后,用 PBST洗滌 3次,每孔加入 150μl 1% BSA 37 ℃封閉1小時(shí)。

3、PBST洗滌 3次后,每孔加入 100 μl不同倍比稀釋度的血清,并加入對照樣品, 37 ℃孵育2小時(shí)。

4、PBST洗滌5次后, 加入100μl稀釋后的HRP標(biāo)記的二抗,37℃孵育1小時(shí)。

5、PBST洗滌5次后,顯色劑顯色 20min后,酶標(biāo)儀上讀取 A405吸收值。

 注意事項(xiàng):

1、一般做倍比稀釋進(jìn)行檢測,需要有相應(yīng)的對照血清。

2、不同的顯色系統(tǒng)對應(yīng)不同的光吸收值。


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