一、血清的制備方法問題

1、問：我的實驗需要自己制備一些血清用于培養細胞，有沒有人知道用于培養細胞的血清需要怎樣的制備過程？

答：自己制備血清當心污染啊。如果無菌條件好的話，用靜置析出方法就行。

2、問：一般我們用得胎牛血清用前還要滅活，我想用大鼠的血，不知道要不要滅活？

答：你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜，離心，取上清，在無菌過濾，也可滅活，然后分裝凍存，用時再配。

3、問：如果滅活會不會對血清中的一些因子有損傷？

答：加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。滅活一般不會對血清中的一些因子損傷的。

二、心肌細胞原代培養時血清的使用問題

1、問：在進行心肌細胞原代培養時，需要用含血清的培養基中止胰酶的消化作用，我現在使用的是含血清10%的培養液，但近日看北醫一個細胞培養的課件發現，有用1%血清培養液進行中止消化的，想問一下，1%的是否可以，效果是否有保證？這樣確實能節省不少血清的。

答：關于心肌細胞元代培養的FBS問題： 

(1)1%的血清*培養基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌細胞元代培養就不行。 10%的FBS*培養基效果都不太好，開始心肌細胞元代培養需要高濃度的FBS，20%左右，但這就有出現另一個問題，在FBS*培養基中，成纖維細胞呈優勢細胞，須得在培養基加入適量的BrdU以抑制其生長，純化心肌細胞。

(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。

(3)元代心肌細胞培養的FBS使用，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的DMEM/F-12培養基培養。

2、問：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的膠原酶。FBS要高濃度遞減是否是說的在細胞培養中啊，難道在消化時終止也需要如此高的濃度嗎，還有，我的BRDU只用到48小時就不用了，因為擔心其損傷太大，可以持續用多久呢？

答：我用10%FBS終止的，然后差速1h，然后還是用10%FBS的HG-dmem養的，沒有用brdu，心肌細胞還是比較多和穩定的，我第3天就可以用，第2天晚上看就會有搏動。