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進口elisa試劑盒具體操作步驟

時間:2017/11/6閱讀:265
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進口elisa試劑盒具體操作步驟
1.操作步驟
(1)細胞染色前,準備3種貯存液:①NBT:用10ml 70%DMF溶解0.5gNBT;②BCIP:用10ml 100%DMF溶解0.5g BCIP[二鈉鹽兒③堿性磷酸酶緩沖液:100mmol/LNaCl,5mmol/LMgCl2,100mmol/LTris(pH 9.5)。所有的貯存液置4C可保存1年。
(2)實驗前,底物液新鮮配制。加66/ul NBT貯存液至10ml堿性磷酸酶緩沖液中,充分混合,加33ul BCIP貯存液,在1h內使用。
(3)將洗滌過的標本片放在一個適當的容器內。加足夠量的底物液覆蓋標本片(3~5ml適合于100mm平皿)。在室溫中進行反應直到染色達到適當黑色。對一些試劑可在顯微鏡下定期監測。一般孵育時間大約是30min。
(4)在含有20mmol/LEDTA的PBS中漂洗以終止反應,螯合Mg2+。
(5)優化:如果需要,進行復染。
(6)用水沖洗,DPX封片。
2.需要的溶液和特殊設備
堿性磷酸酶緩沖液:100retool/L NaCl,5mmol/L MgCl2,100mmol/L Tris(pH9.5);
NBT溶液(0.5gNBT用10ml 70%DMF溶解,貯存在4C);
BCIP溶液(0.5gBCIP[二鈉鹽]用10m1100%DMF溶解,貯存在413);
20mmol/LEDTA用PBS溶解,DPX。
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