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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)特點(diǎn)歸納

時間:2024/10/28閱讀:354
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    PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級別。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一項(xiàng)利用 DNA 雙鏈復(fù)制原理,在生物體外復(fù)制特定 DNA 片段的的核酸合成技術(shù)。

技術(shù)特點(diǎn):

1、靈敏度高

PCR 產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg = 10-12)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(μg=-6)水平。能從 100 萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR 的靈敏度可達(dá) 3 個 RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中最小檢出率為 3 個細(xì)菌。

2、特異性強(qiáng)

PCR 反應(yīng)的特異性決定因素:

引物與模板 DNA 特異正確的結(jié)合;

堿基配對原則;

Taq 聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

靶基因的特異性與保守性。

3、簡便、快速

只需要一次性將反應(yīng)液加好后,就可以進(jìn)行擴(kuò)增。一般 2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

4、純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及 RNA 均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗漱液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等 DNA 擴(kuò)增檢測。


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