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進(jìn)口elisa試劑盒檢測方法

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進(jìn)口elisa試劑盒檢測方法
zui常用的檢測方法是以培養(yǎng)的Hep—2細(xì)胞為抗原基質(zhì)的IIF法。AFA熒光圖形為間期細(xì)胞核仁清晰的塊狀著染(2~6個),在分裂中后期細(xì)胞染色質(zhì)呈邊緣清晰的致密著染,借此可與其他核仁型抗體區(qū)別。
以純化的核、核仁為抗原基質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡(免疫印跡)、免疫沉淀法也是常用的檢測方法。三種方法均存在不足,免疫沉淀法可能會檢測到其他snoRNP成分抗體而出現(xiàn)假陽性;IIF法及蛋白質(zhì)印跡法可能將與原纖維蛋白分布或分子量相同其他核仁成分的抗體誤認(rèn)為是AFA。以cDNA克隆在真核細(xì)胞表達(dá)、修飾后的原纖維蛋白為抗原建立的蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀法,將大大提高檢測的特異性。
水溶液提?。河捎诘鞍踪|(zhì)大部分溶于水、稀酸和稀堿溶液,因此提取蛋白質(zhì)以水溶液為主,其中尤以稀鹽液和緩沖液對蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好,溶解度大,氫是zui常用的溶劑。應(yīng)注意下列幾點(diǎn):①鹽濃度,常用等滲溶液,尤以0.02~0.05mol/L磷酸鹽緩沖液或碳酸鹽緩沖液、0.15mol/應(yīng)用較多。如酵母脫氫酶以0.66mol/L磷酸氫二鈉溶液提取,6-磷酸葡萄糖脫氫酶以0.1mol/L碳酸氫鈉液提取,脫氧核糖核蛋白在低鹽溶液中溶解度小,就要用1mol/L以上的提取,而某些脂肪酶,用水提取比低鹽溶液提取效果更好。②pH值的選擇對蛋白質(zhì)提取頗為重要,因為蛋白質(zhì)的溶解度和穩(wěn)定性與pH值關(guān)系很大。提取液的pH值首先要保證在蛋白質(zhì)穩(wěn)定的范疇內(nèi),通常在等電點(diǎn)的兩側(cè),堿性蛋白如細(xì)胞色素C和溶菌酶選在偏酸一側(cè),酸性蛋白如肌肉甘油醛-3-磷酸脫氫酶應(yīng)選在偏堿一側(cè)。③溫度:為防止活性蛋白變性、降解而失活,溫度通常選在5℃以下。對少數(shù)耐溫的蛋白質(zhì)和酶,可適當(dāng)提高溫度,使雜蛋白變性分離,有利于提純,如胃蛋白酶、酵母醇脫氫酶以及許多多肽激素可選擇37~50℃條件下提取,效果比低溫提取更好。
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