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elisa試劑盒檢測熒光定量PCR的幾種方法比較

時間:2016/12/28閱讀:599
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進口elisa試劑盒常見熒光定量PCR方法比較
一、SYBR Green I檢測模式 是一種能與雙鏈 DNA 結合發光的熒光染料。其與雙鏈 DNA 結合后, 熒光大大增強。因此, SYBR Green I 的熒光信號強度與雙鏈 DNA 的數量相關,可以根據熒光信號檢測出 PCR 體系存在的雙鏈 DNA 數量。SYBR Green I 的zui大吸收波長約為 497nm,發射波長zui大約為 520nm。PCR 擴增程序一般為 94℃~55℃~72℃三步法,40 個循環。SYBR Green I 的缺點:由于 SYBR Green I 沒有特異性,不能識別特定的雙鏈,只要是雙鏈就會結合發光,對 PCR 反應中的非特異性擴增或引物二聚體也會產生熒光,通常本底較高,所以在臨床上使用可能會有假陽性發生。SYBR Green I 的優點:SYBR Green I 的優點是因為其缺點產生,由于它能所有的雙鏈DNA相結合,所以對不同模板不需特別定制不同的特異性探針,通用性較好,并且價格相對較低。這對科研是很有利的,因此國內外在科研中使用比較普遍。

二、雜交探針模式(Beacon、FRET)分子信標是一種呈發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,因此標記在一端的熒光基團與標記在另一端的淬滅基團緊緊靠近。熒光基團被激發后產生的光子被淬滅劑淬滅,由熒光基團產生的能量以紅外而不是可見光形式釋放出來。分子信標的莖環結構中,環一般為 15-30 個核苷酸長,并與目標序列互補;莖一般 5-7 個核苷酸長,并相互配對形成莖的結構。熒光基團標記在探針的一端,而淬滅劑則標記在另一端。在復性溫度下,因為模板不存在時形成莖環結構,當加熱變性會互補配對的莖環雙鏈解開,如果有模板存在環序列將與模板配對。與模板配對后,分子信標將成鏈狀而非發夾狀,使得熒光基團與淬滅劑分開。當熒光基團被激發時,因淬滅作用被解除,發出激發光子。由于是酶切作用的存在,分子信標也是積累熒光。

三、水解探針模式(Taqman探針)是一種寡核苷酸探針,熒光基團連接在探針的 5’末端, 而淬滅劑則在 3’末端。當探針與靶序列配對時,熒光基團發射的熒光因與 3’端的淬滅劑接近而被淬滅。在進行延伸反應時,聚合酶的 5’外切酶活性將探針切斷,使得熒光基團與淬滅劑分離,發射熒光。一分子的產物生成就伴隨著一分子的熒光信號的產生。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此 Taqman 探針檢測的是積累熒光。進口elisa試劑盒
明黨參    規格:1g    英文名稱:Changium smyrnioides        保存:-20℃,避光
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雞冠花    規格:2g    英文名稱:Cockscomb        保存:-20℃,避光
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扶芳藤    規格:10.0g    英文名稱:Euonymus fortunei        保存:-20℃,避光
蘆根    規格:1g    英文名稱:Reed rhizome        保存:-20℃,避光
花椒(青椒)    規格:2g    英文名稱:Pepper (pepper)        保存:-20℃,避光
麥芽    規格:5g    英文名稱:Malt        保存:-20℃,避光
卷柏(墊狀卷柏)    規格:2g    英文名稱:Selaginella (Selaginella pulvinata)        保存:-20℃,避光
紅芪    規格:5g    英文名稱:Radix Hedysari        保存:-20℃,避光
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