ELISA試劑盒生物學(xué)研討離不開定量。關(guān)于必定定量，一般需求運用已知濃度的分子制造標準曲線。近來，研討人員介紹了一種新方法，能運用串聯(lián)質(zhì)譜儀對多個蛋白質(zhì)進行必定定量。
在MARQUIS方法中，關(guān)于每個待定量的肽段，研討人員樹立重同位素符號的肽段。他們以不一樣的量混合這些肽段，并在組織或細胞裂解后立即將一種混合物參與每個生物樣品中。研討小組的負責(zé)人認為：“這是要害的一步。你要盡早參與這些肽段，這么重同位素符號肽段和內(nèi)源肽段的丟掉可一同發(fā)作。
ELISA試劑盒隨后以同位素試劑符號樣品，并參與質(zhì)譜儀中。每個肽段發(fā)作兩個峰：“重”峰代表組成的（加標）肽段，而“輕”峰代表內(nèi)源性蛋白。經(jīng)過定量前者碎片化所發(fā)作的符號離子，研討人員能發(fā)作每個肽段的標準曲線。今后他們能測定對應(yīng)內(nèi)源性肽段的信號，判定樣品中存在多少分子。
研討小組運用MARQUIS定量了EGFR信號通路中的*磷酸化。在幾種配體影響今后，他們在多個時間點定量了EGFR網(wǎng)絡(luò)內(nèi)的磷酸化動力學(xué)，完結(jié)了EGFR磷酸化位點的定量對比，并證明了關(guān)于每種配體，受體磷酸化在性質(zhì)上相似，但數(shù)量上不一樣。他們還培養(yǎng)了膠質(zhì)母細胞瘤異種移植物，并運用這種方法定量了EGFR激酶克制的作用。
ELISA試劑盒據(jù)介紹，MARQUIS能一同定量10個樣品中多達100種肽段。這只需求一臺串聯(lián)質(zhì)譜儀（如三重四級桿）、市售的同位素符號試劑，以及重同位素符號的組成肽段。每個人都能完結(jié)。咱們希望創(chuàng)建出一種恰當簡略的方法，而不需求什么訣竅。