ELISA試劑盒制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只需待血清天然凝集、縮短后即可獲得。
如有細菌污染，菌體中或許富含內源性HRP，也會發作假陽性反應。
如在冰箱中保留過久，其間的可發作聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。
ELISA的操作因固相載體的構成不一樣而有所區別，國內醫學查驗通常均用板式點。
除特殊情況外，在醫學查驗中均以血清作為檢查標本。在ELISA中血漿和血清可對等運用。
有些標本可直接進行測定（如血清、尿液），有些則需經預處理（如大便和某些分泌物）。
血清標本可按常規辦法收集，應留心防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標本或許會增加非特異性顯色。
在5天內測定的血清標本可放置于4℃，跨越一星期測定的需低溫冰存。
ELISA試劑盒血清標本宜在新鮮時檢查。
凍住血清融解后，蛋白質有些濃縮，散布不均，應充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上激烈振動。
混濁或有堆積的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢查。自配的緩沖液運用pH計丈量較正。
重復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保留作多次檢查，宜少量分裝冰存。
本次實驗不需用的有些應及時放回冰箱保留。
按試劑盒說明書的央求準備實驗中需用的試劑。
ELISA頂用的蒸餾水或去離子水，包含用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的。
大多數ELISA檢查均以血清為標本。從冰箱中取出的實驗用試劑應待溫度與室溫平衡后運用。
血漿中除尚富含纖維蛋白原和抗凝劑外，別的成份均對等于血清。
ELISA試劑盒保留血清自收集時就應留心無菌操作，也可參與恰當防腐劑。