隨著科技發(fā)展進步,在液相色譜法中,圍繞如何提高色譜柱效率這個中心問題,填充色譜柱的固定相已發(fā)生了急劇的變化,由無定形填料到球形填料,由薄殼型填料到全多孔填料,由大顆粒到小顆粒,由全多孔粒子到灌流色譜的流通粒子,由全多孔球形微粒到非多孔的更小微粒。上述柱填料的變化使色譜工作者利用降低柱填料粒徑的方法,已使色譜柱的柱效相對穩(wěn)定在10000~25000塊/m(理論塔板數)之間。
在使用小粒徑的填料會導致色譜柱高壓力降低,使用現(xiàn)代液相色譜儀設備,其*的操作壓力基本已限定在35~40MPa,因此當欲用1~3μm的柱填料時,只能使用3~5cm的短色譜柱,這樣通過調節(jié)柱長,而使所希望的柱效和柱壓力降之間的矛盾得到妥善的解決,但此時只能使用較低的流速來實現(xiàn)快速分析。在液相色譜儀分析中,如欲在較短分析時間內獲得高柱效,可以采用以下幾種方法:
1 使用填充微小粒子(1~1.5μm)的毛細管柱(50cm),再直接施加以超高壓(100~400MPa),此即為超高壓毛細管液相色譜。
2 使用開管柱液相色譜,由于柱制備和柱容量的局限,至今未獲得發(fā)展。
3 使用如毛細管電泳中的電滲流。它不存在壓力降,但需使用專門的電滲泵。
4 在高柱溫下操作,由于涉及流動相的揮發(fā)性在實踐中存在一定困難。
5 通過增強色譜柱的滲透性、以降低柱壓力降、并促進溶質的傳質擴散。這可通過使用具有高滲透性的整體色譜柱來實現(xiàn)這一目的。
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