| 聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。經(jīng)過二十多年的發(fā)展應(yīng)用，如今PCR基因擴(kuò)增儀，成為醫(yī)學(xué)，農(nóng)業(yè)，食品，醫(yī)藥，檢驗(yàn)檢疫等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器設(shè)備。由于它是新興科學(xué)領(lǐng)域中發(fā)展起來的，且應(yīng)用廣泛，于是很多商家大量投入資金，購買新技術(shù)，對其進(jìn)行研發(fā)生產(chǎn)。PCR儀核心的經(jīng)過不斷改進(jìn)，已經(jīng)越來越完善和智能化，儀器擴(kuò)增時(shí)間從過去小時(shí)才可以完成的，縮短到現(xiàn)在只需幾十分鐘便可完成基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。市場上不同廠家生產(chǎn)的PCR儀型號都是自己編寫的，儀器的技術(shù)參數(shù)也各不相同，計(jì)算技術(shù)參數(shù)基本相同，價(jià)格卻千差萬別，于是給用戶選擇帶來了困惑和麻煩。根據(jù)本人所接觸和使用PCR儀器和畢業(yè)后多年從事分子生物器材PCR儀的銷售。下面我將自己使用以及客戶詢問和反饋的信息，作一個(gè)PCR儀選購總結(jié)分享給廣大用戶！ 一．PCR儀的種類有： 常規(guī)的普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類！ 二．PCR儀的工作模式，功能和應(yīng)用領(lǐng)域： 1.普通PCR儀：是由主機(jī)，加熱模塊，PCR管，熱蓋，控制軟件組成。根據(jù)DNA片段高溫解鏈，降溫配對聚合原理，通過循環(huán)改變加熱模塊的溫度，微量不易于分辨的的DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增成大量的DNA片段，從而對其進(jìn)行分析鑒定。根據(jù)需要可結(jié)合電泳儀，水平電泳槽，一起應(yīng)用。主要應(yīng)用與醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)，食品檢測，科研機(jī)構(gòu)，高等院校教學(xué)對遺傳變異，基因表達(dá)等進(jìn)行研究。 2.梯度PCR儀：工作模式和原理同普通PCR儀一樣，它出了又普通PCR儀的功能外還多了一個(gè)梯度退火功能。DNA片段的擴(kuò)增對溫度的控制精度要求特別高，不同的DNA片段其退火溫度不一樣，通過計(jì)算DNA片段中的CG堿基的含量只能初步的判斷出*退火溫度在+5℃范圍內(nèi)，如果用普通PCR儀進(jìn)行研究，需重復(fù)擴(kuò)增很多次，然后做電泳進(jìn)行分析來確定*退火溫度。而梯度PCR儀則只需要一次就可以完成，在節(jié)省了時(shí)間的同時(shí)提高了實(shí)驗(yàn)的可靠性和準(zhǔn)確性。主要應(yīng)用于科研機(jī)構(gòu)，醫(yī)學(xué)臨床研究，高等院校，病毒分析，疾控中心等。 3.原位PCR儀：是由主機(jī)，加熱模塊，玻片，熱蓋，控制軟件組成。主要是應(yīng)用對細(xì)胞或組織內(nèi)的DNA片段進(jìn)行原位擴(kuò)增分析-即定位分析。無需將細(xì)胞破碎提取DNA，細(xì)胞內(nèi)有DNA酶的作用擴(kuò)增受到一定的影響，使用不是很普片。主要用于醫(yī)學(xué)臨床研究，如癌細(xì)胞等。 4. 定量PCR儀主要由兩部分組成，一個(gè)是PCR系統(tǒng)（普通的PCR儀原理相同），一個(gè)是熒光檢測系統(tǒng)組成。與普通PCR儀，梯度PCR儀相比，無需做電泳分析，實(shí)驗(yàn)一步檢測完成。根據(jù)熒光檢測系統(tǒng)的通道不同，可分為單通道，雙通道和多通道。多色多通道檢測是當(dāng)今的主流趨勢--儀器的激發(fā)通道越多，儀器適用的熒光素種類越多，儀器適用范圍就越寬；多通道指可同時(shí)檢測一個(gè)樣品中的多種熒光，儀器就可以同時(shí)檢測單管內(nèi)多模版或者內(nèi)標(biāo)+樣品，通道越多，儀器適用范圍越寬、性能就更強(qiáng)大，價(jià)格也Z為昂貴?？蛻艨筛鶕?jù)自己的需要進(jìn)行選擇，如果沒有用到多通道的，建議不要購買，等于購買了無用的功能，建議購買2或者3通道的就已經(jīng)滿足夠用。熒光檢測系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源和檢測器。激發(fā)光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發(fā)光二極管LED光源，前者可配多色濾光鏡實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長，而單色發(fā)光二極管LED價(jià)格低、能耗少、壽命長，不過因?yàn)槭菃紊?，需要不同的LED才能更好地實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長。監(jiān)測系統(tǒng)有超低溫CCD成像系統(tǒng)和PMT光電倍增管，前者可以一次對多點(diǎn)成像，后者靈敏度高但一次只能掃描一個(gè)樣品，需要通過逐個(gè)掃描實(shí)現(xiàn)多樣品檢測，對于大量樣品來說需要較長的時(shí)間。主要應(yīng)用領(lǐng)域,動物疾病檢測：禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。食品安全：食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測?？茖W(xué)研究：醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究、大學(xué)及研究所等 三、國產(chǎn)和進(jìn)口PCR儀的比較： 1． 儀器性能：進(jìn)口PCR以，和國產(chǎn)的PCR儀，在技術(shù)和使用性能上基本上沒有多大的差別，比如：升降溫速率，孔間溫差，溫度均一性，梯度溫度范圍，熱蓋溫度等性能指標(biāo)，國內(nèi)外儀器基本達(dá)到了相同水平。而其差別主要是在功能上的差別，價(jià)格確實(shí)相差幾倍。 2． 儀器功能：進(jìn)口和國產(chǎn)儀器主要功能：如保存，過溫保護(hù)，斷電保護(hù)，熱蓋功能等基本上是一樣的，只是附帶功能上有所差別，比如：進(jìn)口的顯示屏是大型的觸摸式熒屏操作，國產(chǎn)的大多是觸摸鍵，熒屏顯示操作，進(jìn)口儀器有的可以升級為熒光定量PCR儀，而國產(chǎn)的目前主要是機(jī)。而這些儀器附帶功能的差別大多都是Z近兩年新推出來的，價(jià)格確是相差幾倍。有的進(jìn)口儀器沒有這些附帶的特殊功能，從性能和功能上比有的等于或低于國產(chǎn)的，比如：上海領(lǐng)成的TCT3型梯度PCR儀成交價(jià)格3萬以內(nèi)，進(jìn)口的同等性能和功能指標(biāo)的儀器，成交價(jià)格卻是4-5萬元以上。 3． PCR儀的模塊：模塊是影響實(shí)驗(yàn)的主要因素，升溫快慢，溫度均勻性，直接由它來實(shí)現(xiàn)的，而影響實(shí)驗(yàn)的主要因素是溫度的控制，于是很多商家都從模塊上下功夫?qū)ζ涓M(jìn)。從Z初的鋁合金模塊，發(fā)展到銀模塊，但是銀容易被氧化，于是就在銀槽上鍍上一層黃金，產(chǎn)生了鍍金銀槽。銀模塊的導(dǎo)熱性能的確比鋁合金的提高了差不多一倍，縮短了升降溫時(shí)間，從而縮短了擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，提高了工作效率，快速PCR儀就在這種情況下誕生的。價(jià)格卻比原來的儀器貴了好幾萬。比如原來鋁合金的成交價(jià)是：7萬元，換鍍金銀槽后價(jià)格成了9萬多。鍍金銀槽的成本真的有那么貴嗎？有的人認(rèn)為上面的黃金很貴，其實(shí)上面的黃金不到1克，現(xiàn)在1克的黃金才200元不到。價(jià)格貴算不了什么，只要實(shí)用性能高就好。但是升溫速率高了，溫控精度就會有所下降，這無疑也對實(shí)驗(yàn)的特異性擴(kuò)增帶來了影響，如果一個(gè)實(shí)驗(yàn)非特異性過高，那么實(shí)驗(yàn)室失敗的。再加上鍍金銀槽價(jià)格昂貴。這也就是市場上使用的大多是鋁合金模塊較多的原因所在。有些PCR儀設(shè)計(jì)成可更換模塊的PCR儀，價(jià)格也比不可更換的要高2萬多，而且還要另外花3萬購買一個(gè)模塊才實(shí)現(xiàn)模塊的更換，作為一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲泄ぷ髡撸ㄟ@樣的多余錢是沒有必要的，通常用0.2ml的96孔模塊的PCR儀就已經(jīng)足夠了，也是*的選擇，因?yàn)椋?.1ml的量太少不利于控制量，會降低特異性；0.5ml的使用試劑量太大，試劑價(jià)格比較昂貴，會增加研究成本，所以0.2ml的模塊是*的選擇。模塊的設(shè)計(jì)原理，市場上大多進(jìn)口的梯度PCR儀模塊的設(shè)計(jì)都是使用熱能的梯度傳遞來設(shè)計(jì)的，而美國ABI的梯度PCR儀是通過單獨(dú)的每排溫度控制來設(shè)計(jì)的，能實(shí)現(xiàn)真正的梯度溫度設(shè)計(jì)。如果經(jīng)費(fèi)許可以考慮美國ABI的Veriti 96孔梯度PCR儀，經(jīng)費(fèi)不足可以購買國產(chǎn)的TCT3型領(lǐng)成梯度PCR儀，這是*的配置選型方案，也是近年來客戶使用反應(yīng)的配置。 4． PCR儀性能參數(shù)的選擇技巧：上海領(lǐng)成生物科技的TCT系列梯度PCR儀，工作溫度范圍：1～99℃，是根據(jù)PCR技術(shù)的三個(gè)熱過程：高溫模板變性（90℃～95℃）、低溫引物退火（42℃～62℃）、適溫引物延伸（65℃～75℃）的要求，同時(shí)考慮到其他方面試驗(yàn)要求而確定的。而變，退火，延伸三個(gè)過程的溫度選擇取決于溫度與時(shí)間，取決于酶的活性、引物的長度、堿基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。在溫度范圍符合的條件下，接下來就是看儀器的控溫精度。如：上海領(lǐng)成生物科技有限公司生產(chǎn)的TC系列PCR擴(kuò)增儀，BLOCK（模塊）升降溫速率（Max.）：≥4.0℃/sec、樣品升降溫速率（Max.）：≥3.5℃/sec、溫度顯示精度：±0.1℃、溫度準(zhǔn)確度：±0.2℃、溫度均勻性（孔間溫度偏差）：±0.2℃，這些主要技術(shù)參數(shù)都達(dá)到了*水平，可以與“PCR儀*”美國ABI、美國伯樂和德國Eppendorf相比。 5． 附帶功能選擇：很多商家為了突出自己儀器的優(yōu)點(diǎn)，把賣點(diǎn)指向儀器的附帶功能上，市場上PCR儀主要參數(shù)都是滿足實(shí)驗(yàn)要求，達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康模芏嘤脩舭堰x擇的標(biāo)準(zhǔn)方到了儀器的其他附帶功能上。比如文件的存儲量，不影響實(shí)驗(yàn)的使用效果一般梯度PCR儀在800個(gè)已經(jīng)很大了。又比如升級熒光定量PCR儀，覺得沒有這個(gè)必要，因?yàn)樯壍臎]有專門做熒光定量的PCR儀性能那樣的穩(wěn)定和可靠。而且升級實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀也是還要另外增加昂貴的升級費(fèi)用才能用，再一個(gè)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，每年都有新的產(chǎn)品，技術(shù)也在不短的更新。如果現(xiàn)在不用，將來用的話，還不如到用的時(shí)候才買。到時(shí)價(jià)格會更低。例子很簡單：就如現(xiàn)在的手機(jī)一樣，功能很多的，價(jià)格很貴，但是有好多功能都不用的，一年過后又有新性能的手機(jī)推出，原來貴的價(jià)格又變很低了。所以我建議購買PCR以時(shí)，進(jìn)口品牌以美國ABI的PCR儀（2720型PCR儀、Veriti 96孔梯度PCR儀，step one實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀）為參考標(biāo)準(zhǔn)，功能簡單，性能穩(wěn)定，價(jià)格合理。購買國產(chǎn)的PCR儀以上海領(lǐng)成的PCR儀（TCG3型領(lǐng)成科研型PCR基因擴(kuò)增儀、TCT3型領(lǐng)成梯度PCR儀、TC988C領(lǐng)成科研型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀）為參考標(biāo)準(zhǔn)，功能和性能可以和大多數(shù)進(jìn)口品牌相比。 四、安裝調(diào)試及售后服務(wù)： PCR儀不再向幾年前那么的奧秘，也并非想象中的那么難，現(xiàn)在的PCR儀已經(jīng)普及化，已成為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的儀器設(shè)備。安裝調(diào)試也非常的簡單，特別是普通PCR儀，梯度PCR儀在儀器出廠前都經(jīng)過嚴(yán)格的檢測和調(diào)試好的，使用客戶使用時(shí)只需接通電源就可以使用。很多客戶擔(dān)心儀器安裝調(diào)試問題，于是寧愿花貴幾千塊錢，也要工程師上門安裝調(diào)試，我覺得沒有這個(gè)必要。包裝箱里有使用說明書，如果使用過程中有什么問題一個(gè)就解決了，一個(gè)才幾塊錢，為什么要去多花幾千塊錢呢？而且PCR儀使用過程中只要您按照說明去操作，不要人為的用蠻力去摔打和用力去擰，一般是不會損壞的。所以客戶在購買普通PCR儀和梯度PCR儀這類操作簡單的儀器時(shí)無需工程師上門安裝調(diào)試。他的使用和購買一臺電視機(jī)使用一樣的那么簡單，沒有必要去多花這幾千塊錢。維修及售后服務(wù)，儀器如果是出現(xiàn)什么異常的現(xiàn)象，可以給總部維修工程師或者是供方打，工程師可以根據(jù)你的描述指導(dǎo)你進(jìn)行調(diào)試，如果無法調(diào)試的，在保修期內(nèi)，非人為損壞的儀器的維修來回運(yùn)費(fèi)和維修費(fèi)用由供貨承擔(dān)。就算是花高價(jià)和當(dāng)?shù)氐拇砩藤徺I，儀器涉及到簡單的調(diào)試他們會，但是嚴(yán)重?fù)p壞涉及到換零配件的，他們也是得遞回總部來維修，因?yàn)橹挥锌偛烤S修配件和工具是Z集全的。 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀安裝調(diào)試相對普通的PCR儀較為復(fù)雜，所以需工程師上門安裝調(diào)試，安裝調(diào)試費(fèi)用也已經(jīng)算在了儀器里面，客戶購買后總部或者廠家的工程師會按照的時(shí)間上面安裝調(diào)試。 五、結(jié)語：以上的推薦是結(jié)合多年來客戶對PCR以使用情況和市場普及情況來進(jìn)行分析總結(jié)的結(jié)果。 |
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