蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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骨髓間充質干細胞在誘導培養基的作用下，會逐漸向軟骨細胞方向分化,軟骨細胞外具有一層富含蛋白多糖的基質，是成軟骨分化的標志物，可被阿利辛藍染成藍綠色。骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養基適用于骨髓間充質干細胞成軟骨誘導，能提高誘導效率。產品特點：產品性能穩定，可提高骨髓間充質干細胞成軟骨誘導效率;同時適用于骨髓間充質干細胞平面誘導和三維誘導;含染色液，方便使用；即用型產品，開封即可使用，更省時省力。
骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養基
產品簡介
骨髓間充質干細胞在誘導培養基的作用下，會逐漸向軟骨細胞方向分化,軟骨細胞外具有一層富含蛋白多糖的基質，是成軟骨分化的標志物，可被阿利辛藍染成藍綠色。骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養基適用于骨髓間充質干細胞成軟骨誘導，能提高誘導效率。
骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養基
產品特點：
（以下步驟僅供參考，詳情參見說明書）
1. 間充質干細胞的準備:
將對數生長期的細胞消化下來計數，取3×105個細胞轉移到15mL離心管中，250g離心4min。
棄上清，加入0.5mL成軟骨誘導分化培養基基礎液，重懸細胞，150g離心5min。小心棄去上清，加入0.5mL成軟骨誘導分化培養基誘導液，重懸細胞，150g離心5min。
將15mL離心管的管蓋稍稍旋開，放置于37℃，5% CO2培養環境下培養。
2. 細胞分化誘導:
24h后觀察細胞沉淀形變團聚的情況，如有明顯的變化，則小心輕柔地撥動管底，嘗試讓細胞團脫離管底，全部浸潤在誘導液中。
置于37℃，5% CO2培養環境下培養約21天，通常每2天更換一次新鮮配制的成軟骨誘導分化培養基誘導液。注意觀察細胞團成球情況及表面光滑度，決定終止細胞誘導的時間，并進行染色鑒定。
3. 染色鑒定
a)軟骨球固定：將軟骨球從離心管中轉移至EP管，并使用1×PBS清洗兩次，最后置于適量的4%中性中。
b)石蠟包埋切片：軟骨球經石蠟包埋后切片。
c)阿利辛藍染色：將石蠟切片脫蠟，使用阿利辛藍染液染色30min，用自來水流水沖洗2min，蒸餾水沖洗1次。
d)誘導評估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，軟骨組織中的內酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。
NOTE: 間充質干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源，培養條件、細胞代次、細胞狀態和分化時間等因素而異。
| 舉例說明：成軟骨誘導步驟（平面誘導）
（以下步驟僅供參考，詳情參見說明書）
1. 將對數生長期的細胞消化下來計數，成軟骨誘導分化培養基細胞重懸細胞，離心后調整細胞密度密度1-2.0×107cells/mL。
2. 20μL懸滴到24孔板。（20μL含有4×105細胞）。37℃培養3h使細胞貼壁。
3. 補充200uL誘導分化培養基正常培養，每隔2-3天換液一次。按照以上換液頻率誘導21-28天，并注意觀察細胞形態變化。
4. 細胞固定：吸去培養基使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性覆蓋培養器皿底面，室溫固定30-60min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。
5. 阿利新藍染色：向清洗干凈的誘導孔內加入適量染色液，避光靜置染色30min。吸去阿利新藍染色液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細胞干燥。
6. 誘導評估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，軟骨組織中的內酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。
NOTE:間充質干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源，培養條件、細胞代次、細胞狀態和分化時間等因素而異。
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