蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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TIANSeq rRNA Depletion Kit -RNA去除試劑盒試劑盒對于完整和部分降解的總RNA（如FFPE RNA）均具有較好的rRNA去除效 果，所獲得的去除了rRNA的RNA樣本可用于mRNA和非編碼RNA高通量測序，可提高測序結果中有效數據比例，純化產物也可用于隨機引物cDNA合成或其它下游應用。
產品簡介
TIANSeq rRNA Depletion Kit (H/M/R) 采用特殊設計的DNA探針與核糖體RNA（rRNA）結合，利用Ribo RNase H降解DNA-rRNA雜交鏈中的rRNA，從而去除人、小鼠、大鼠 總RNA中的細胞質核糖體RNA（28S、18S、5.8S、5S）和線粒體內核糖體RNA（16S、 12S），保留信使RNA（mRNA）和其它非編碼RNA。
該試劑盒對于完整和部分降解的總RNA（如FFPE RNA）均具有較好的rRNA去除效 果，所獲得的去除了rRNA的RNA樣本可用于mRNA和非編碼RNA高通量測序，可提高測序結果中有效數據比例，純化產物也可用于隨機引物cDNA合成或其它下游應用。
產品特點
推薦使用的其他試劑
1. 去除rRNA的RNA純化：TIANSeq RNA Clean Beads (TIANGEN Cat#NG307)。
2. PCR檢測rRNA去除效率，FastKing RT Kit (With gDNase) (TIANGEN Cat#KR116), SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) (TIANGEN Cat#FP205) 。
注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1. 操作過程請注意避免核酸樣品和產物之間的交叉污染。
2. 請使用不含RNA酶或DNA酶的槍頭、離心管進行實驗。
3. 實驗開始前，請清潔操作臺，建議使用RNA酶及DNA酶清除試劑處理臺面。
確保沒有 RNA酶和DNA酶的污染。
4. 瞬時離心，將樣品置于PCR儀中（啟用熱蓋99~105℃均可），按以下程序操作，總共耗 時約20 min。
注意：必須慢速降溫(每秒降溫0.1℃)，使探針與rRNA充分結合。
四、RNA純化
推薦使用磁珠純化產品TIANSeq RNA Clean Beads (TIANGEN Cat#NG307)，也可使 用Agencourt RNAClean XP (Beckman Coulter)。
1. 渦旋振蕩混勻TIANSeq RNA Clean Beads，吸取110 μl （2.2倍體積） 至步驟三的50 μl RNA產物，用移液器吸吹混勻10次。
2. 室溫靜置15 min，使RNA充分結合到磁珠上。
3. 將樣品置于磁力架上5 min，待溶液澄清后，用移液器小心移除上清。
4. 保持樣品始終處于磁力架上，加入200 μl新鮮配制的80%乙醇 （每次實驗需要新鮮配 制，因為乙醇易從空氣中吸收水分，濃度降低影響實驗效果）漂洗磁珠 （不要吹散磁 珠） ，室溫孵育30 sec，小心移除上清。
5. 重復步驟4進行漂洗。
6. 取出離心管短暫低速離心 (<2000 g, 10 sec) ，使液體收集至管底，將樣品放回磁力架， 用移液器小心棄去所有液體。
7. 保持樣品始終處于磁力架上，開蓋晾干磁珠3～5 min （不要過度干燥，否則可能降低 RNA回收率。洗脫應當在磁珠依然顯深棕色且光亮，而且所有可見液體已揮發時進 行。若磁珠出現裂縫，則表示已過度干燥）。
8. 將樣品從磁力架上取出，加入6.5 μl RNase-Free ddH2O ，用移液器吹打10次混勻磁珠， 室溫靜置2 min。
注意：上述洗脫體積適用于TIANSeq RNA文庫構建試劑盒NR102或NR103，如搭配其他 RNA建庫產品，請根據產品說明書選擇合適的洗脫體積。
9. 在磁力架上靜置2 min，待溶液澄清后，不要觸動磁珠，小心吸取5 μl上清 （可根據步驟8 選擇的實際洗脫體積進行相應調整，盡量充分利用洗脫產物）至新的Nuclease-Free PCR 管。
10. 洗脫樣品可立即用于RNA測序文庫構建或其他分析應用，也可在-20℃保存過夜或 在-80℃保存30天。
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