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CCK8細胞增殖和活性檢測試劑盒-cck8法檢測細胞活力- cck8試劑-碧云天生物

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更新時間：2023-04-10 08:09:25瀏覽次數：229次

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產品簡介

用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物的篩選、細胞增值的測定、細胞毒性檢測以及藥敏等與細胞活性和增殖相關的實驗。本試劑盒使用方便，試劑盒包含一管已經配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液，即開即用，無需其他準備步驟。

詳細介紹

CCK-8 細胞增殖與活性檢測試劑盒- cck8法檢測細胞活力

CCK-8細胞毒性檢測試劑盒

貨號	規格
BDXB0002-5	5ml
BDXB0002-10	10ml
BDXB0002-30	30ml

產品概述

用途

CCK-8法	MTT法
還原后的甲臜是水溶性的（不需要溶解）	還原后的甲臜是非水溶性的（需要加有機溶劑溶解）
重現性好	重現性差
操作簡單	操作繁瑣
測定波長：450-490nm	測定波長：550-600nm
單一溶液，即開即用	需要加有機溶劑，有毒性

參考數據

使用方法

一、制作標準曲線（測定細胞具體數量時）

1. 先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。

2. 按比例（例如：1/2比例）依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。

3. 接種后培養2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數量為橫坐標，OD值為縱坐標的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（適用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，尤其加入CCK-8后的培養時間要一致）。

二、細胞活性檢測 1. 在96孔板中接種細胞懸液（100μl/孔）。

1.將培養板放在培養箱中預培養（37℃，5% CO2）。

2. 向每孔加入10μl的CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，以免影響OD的讀數）。

3. 將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

4. 用酶標儀測定450nm處的吸光度。

5. 如果暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μl的0.1M的HCl溶液或1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光室溫保存，24小時內吸光度不會發生變化。

三、細胞增殖-毒性檢測（以96孔板為例）

1. 在96孔板中配置100μl的細胞懸液（通常細胞增殖實驗每孔加入100μl約2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100μl約5000個細胞。具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定）。按照實驗需要，進行預培養。

2. 向培養板加入1-10μl不同濃度的待測藥物刺激。

3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（后面有具體細胞的建議時間，例如：6、12、 24或48小時）。

4. 每孔加入10μl的CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，以免影響OD讀數）。如果起始的培養體積為200μl，則需加入20μl CCK-8溶液，其他情況以此類推。可以用加了相應量細胞培養液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測，需設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。

5. 在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時（對于大多數情況孵育1小時就可以）。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2 和4小時候分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。

6. 用酶標儀測定在450nm處的吸光度。可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定。

7. 如果暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μl 0.1M的HCl溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光室溫保存，24小時內吸光度不會發生變化。

注意：如果待測物質有氧化或還原特性，可在加CCK-8之前更換新鮮培養基（先用培養基洗滌細胞兩次），去掉藥物影響。如果藥物影響比較小，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

活力計算

細胞活力*（%）=[A（加藥）-A（空白）]/[A（0 加藥）-A（空白）] ×100 A

（加藥）：具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度 A

（空白）：具有培養基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度 A

（0 加藥）：具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度 *細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

注意事項

1. 由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。

2. CCK-8檢測細胞活性原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應。任何待測體系中存在還原劑，例一些抗氧化劑會干擾檢測，需設法去除。

3. 建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。

4. 建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要查到培養基液面下加樣，溶液產生氣泡，會干擾OD讀數。

5. 當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔（100μl培養基）。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500個/孔（100μl培養基），且培養時間長一些。如果要使用24孔板或6孔板實驗，需先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。

6. 加入CCK-8溶液時，如果細胞培養時間較長，培養基顏色已變化或pH值變化，建議換用新鮮的培養基。

7. 如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在450-490nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度。

8. 酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。