本研究對(duì)攜帶SARS-CoV-2全長(zhǎng)或截短S蛋白的G蛋白缺陷型水泡性口炎病毒(VSVdG)的假病毒包裝效率以及不同細(xì)胞系用于假型病毒包裝和感染的效率進(jìn)行了評(píng)價(jià)。研究發(fā)現(xiàn)，VSV-SARS-CoV-2-Sdel18（C末端截短18個(gè)氨基酸的S蛋白）的病毒包裝和感染效率遠(yuǎn)高于VSV-SARS-CoV-2-S。而在本研究所使用的細(xì)胞系中，穩(wěn)定表達(dá)人ACE2的BHK21-hACE2對(duì)感染敏感，Vero-E6對(duì)感染也有中等程度的敏感性，BHK21細(xì)胞對(duì)假病毒幾乎不敏感。基于VSV-SARS-CoV-2-Sdel18假病毒和ACE2過(guò)表達(dá)BHK21細(xì)胞(BHK21-hACE2)，建立了抗體篩選和驗(yàn)證的中和分析模型。通過(guò)對(duì)EGFP陽(yáng)性的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)指征假病毒的感染情況，從而保證了高通量檢測(cè)能力。研究表明，用VSV-SARS-CoV-2-Sdel18假病毒法測(cè)定19例恢復(fù)期患者血清中和效價(jià)，與SARS-CoV-2活病毒法測(cè)定結(jié)果有較好的相關(guān)性。同時(shí)評(píng)價(jià)了7種抗SARS-CoV-2-S受體結(jié)合區(qū)(RBD)中和小鼠單克隆抗體(mAbs)的中和活性。該模型的高效性可助力針對(duì)SARS-CoV-2的新藥和疫苗研發(fā)。
Opera Phenix系統(tǒng)作為本研究中的影像學(xué)數(shù)據(jù)采集和分析的工具，保障了模型的通量和篩選效率。
不同細(xì)胞系假病毒感染效率比較。比較攜帶SARS-CoV-2 S蛋白或VSV G蛋白的VSVdG病毒在Vero-E6、BHK21、293T和BHK21-hACE2細(xì)胞系中的感染效率。
VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18在不同細(xì)胞系中的包裝效率比較。A圖左為各細(xì)胞感染VSVdG-EGFP-G 48h后的情況。A圖右顯示了由三個(gè)細(xì)胞系產(chǎn)生的病毒的不同稀釋度在BHK21-hACE2細(xì)胞中的感染能力。B圖是A圖右對(duì)應(yīng)的GFP陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。
監(jiān)測(cè)VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18感染BHK21-hACE2細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)的EGFP表達(dá)情況。
基于VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18的單克隆抗體的中和篩選。將35株單克隆雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清與VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18病毒共同孵育，然后將混合液加入BHK21-hACE2細(xì)胞中。通過(guò)綠色陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)的減少情況判斷抗體的中和效果。
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