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利用SC-ICP-MS 法測定單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞中的鐵含量

優(yōu)勢：

ICP-MS 法可以分析成批培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞中的總金屬含量，然后根據(jù)測得的細(xì)胞總數(shù)平均算出單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞的鐵含量。由于平板計(jì)數(shù)法無法計(jì)算死亡細(xì)胞或未被培養(yǎng)的完整細(xì)胞，導(dǎo)致計(jì)數(shù)出現(xiàn)誤差。然而，由于儀器的限制，目前還未見有方法可直接分析單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞中的鐵含量。基于單細(xì)胞ICP-MS (SC-ICP-MS) 分析技術(shù)取得的重大進(jìn)展，使得直接測定單個(gè)細(xì)胞內(nèi)金屬含量成為現(xiàn)實(shí)。PerkinElmer 公司的Asperon™單細(xì)胞霧室將單個(gè)完整細(xì)胞引入ICP-MS的等離子體中，結(jié)合NexION® 系列ICP-MS 質(zhì)譜儀瞬時(shí)采集速度快的優(yōu)勢，可確定單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的鐵含量。在本次實(shí)驗(yàn)中，我們利用SC-ICP-MS 法分別測定了三種菌株的單個(gè)細(xì)胞的鐵含量。這三個(gè)菌株分別是大腸桿菌B 株(Eco)、枯草芽孢桿菌168 株(BAC) 和紅球菌RHA1 株(RHA)。SC-ICP-MS 技術(shù)可直接測定單個(gè)細(xì)胞的鐵含量，并確定每種菌株的鐵含量分布情況。鐵含量與細(xì)菌的細(xì)胞大小相關(guān)，即大菌株(RHA)單個(gè)細(xì)胞的平均鐵含量高，而小菌株(Eco) 單個(gè)細(xì)胞的平均鐵含量低。

內(nèi)容簡介：

對(duì)于SC-ICP-MS 分析，大腸桿菌B 株、枯草芽孢桿菌168 株和紅球菌RHA1 株均生長至具有相同的光密度，并離心至一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞聚合體上。然后，立即將樣品冷凍、冷凍干燥并混勻。稱取制備好的樣品(10 - 30 mg) 放入Savillex® PFA 中。加入Optima® 級(jí)濃硝酸在電熱板上進(jìn)行密閉消解。消解后將樣品加熱至近干，復(fù)溶于5 mL 的0.05 M HNO3 中。加拿大國家研究院的NRCC 龍蝦肝胰臟(TORT-1) 作為標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)。使用純氨氣的反應(yīng)模式分析56Fe。

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