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貨號	FS-X9600

產(chǎn)品介紹:

細胞增殖檢測是評估細胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎(chǔ)實驗手段。精確的檢測細胞增殖方法是BrdU法。EdU法檢測試劑盒是brdu方法的革命性突破。EdU（5-溴-2-脫氧嘧啶）試劑盒是一種嘧啶類似物，可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。EdU法檢測是基于“點擊"反應(yīng)，一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴的原子共價反應(yīng)。

本試劑盒中，EdU試劑含有炔烴，而kFlour647染料試劑含有疊氮化合物。點擊法的EdU標(biāo)記增殖快速有效，易于使用。只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標(biāo)記出整合的EdU。標(biāo)準(zhǔn)化的固定和去污劑促滲可以使檢測試劑進入細胞，而brdu方法則需要DNA變性（如酸變性、熱變性或者用Dnase消化）去暴露BrdU，從而方便BrdU抗體結(jié)合。

中文名稱：kFluor647-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：20T|10T|50T

貨號：FS-X9600

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

原鈣黏suβ5(PCDHβ5)檢測試劑盒 forProtocadherinBeta5(PCDHb5)

鞘氨chun-1-磷suan磷suanmei1(SGPP1)檢測試劑盒 forSphingosine-1-PhosphatePhosphatase1(SGPP1)

調(diào)節(jié)激活正常T-細胞表達分泌因子(RANTES)檢測試劑盒 forRegulatedOnActivationInNormalT-CellExpressedAndSecreted(RANTES)

主要性蛋白(MBP)檢測試劑盒 forMajorBasicProtein(MBP)

V-Yes-1Yamaguchi肉瘤病毒相關(guān)癌基因同源物(LYN)檢測試劑盒 forV-Yes-1YamaguchiSarcomaViralRelatedOncogeneHomolog(LYN)

肉毒-O-jia基轉(zhuǎn)移mei(CORT)檢測試劑盒 forCarnitine-O-Octanoyltransferase(CORT)

煙型受體α3(CHRNα3)檢測試劑盒 forCholinergicReceptor,Nicotinic,Alpha3(CHRNa3)

巨噬細胞幼紅細胞黏附蛋白(MAEA)檢測試劑盒 forMacrophageErythroblastAttacher(MAEA)

shi神經(jīng)縮蛋白3(OPA3)檢測試劑盒 forOpticAtrophy3(OPA3)

類胰蛋白mei(TPS)檢測試劑盒 forTryptase(TPS)

載脂蛋白E(APOE)檢測試劑盒 forApolipoproteinE(APOE)

凋亡相關(guān)因子配體(FASL)檢測試劑盒 forFactorRelatedApoptosisLigand(FASL)

脂肪meiM(LIPM)檢測試劑盒 forLipaseM(LIPM)

HtrA絲氨suan肽mei4(HTRA4)檢測試劑盒 forHtrASerinePeptidase4(HTRA4)

Kindlin3蛋白(KIND3)檢測試劑盒 forKindlin3(KIND3)

激肽釋放mei6(KLK6)檢測試劑盒 forKallikrein6(KLK6)

去jia(NE)檢測試劑盒 forNoradrenaline(NE)
kFluor647-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)甜菊雙糖甙A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:300mg 英文名稱：Rebaudioside A

拉定標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cephradine

碳suan鉀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Potassium Carbonate (AS)

標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Perphenazine

鹽suan異丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Promethazine Hydrochloride

嘧達莫標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Dipyridamole

鹽suan去jia咪嗪標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：Desipramine Hydrochloride

維生suK3標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Menadione (Vitamin K3)

lv氮草標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Chlordiazepoxide CIV

benjiasuan鉀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Potassium Benzoate (AS)

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