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β-半乳糖苷酶染色試劑盒(細胞專用)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 15:01:29瀏覽次數(shù):186次

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貨號 FS-X10000
β-半乳糖苷酶染色試劑盒(細胞專用)正在熱銷的產(chǎn)品:SCG3/SgIII 分泌粒蛋白3抗體2--3-吡啶-5- 95%
SCN1A SCN1A抗體2-吡啶-4- 97%
SCN2A SCN2A抗體5-噻吩-2- 97%
SCN9A/NAV1.7 電壓開啟的鈉離子通道SCN9A抗體2-吡啶-5-頻哪酯 98%
SCP2/NLTP 固攜帶蛋白2抗體2,6-二氟苯 98%
SCP3 聯(lián)會

產(chǎn)品介紹:

用途:

培養(yǎng)細胞和組織切片的衰老檢測,又稱X-gal染色液

注意事項:

試劑盒主要由β-半乳糖苷酶固定液、X-gal、半乳糖苷酶染色液等組成。以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產(chǎn)物。

儲存條件:-20℃,避光,12個月

中文名稱:β-半乳糖苷酶染色試劑盒(細胞專用)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:100T

貨號:FS-X10000

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

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椿象紅球菌白分化抗原CD2AP抗體Human SIAE(Sialic Acid Acetylesterase) 人突觸泡蛋白抗體(SYP-Ab)免疫試劑盒

沙場鏈霉菌CD3/CD3-ε 抗體Human Anti HCV(Hepatitis C Virus Antibody) 人突觸泡蛋白(SYP)免疫試劑盒

多殺性巴氏桿菌Pasteurella│multocida 質(zhì)量規(guī)格:>98%Corin 覆盆子

圓錐曲霉Aspergillus│conicus 質(zhì)量規(guī)格:>97%,單氧化(MAO)抑制劑COP9 結(jié)構(gòu)光形態(tài)發(fā)生同源物亞基2試劑盒飛蓬酯乙

綠色鏈霉菌Streptomyces│viridis 質(zhì)量規(guī)格:>96.5%,BSCOLL2-1NO2 飛蓬
β-半乳糖苷酶染色試劑盒(細胞專用)干酪乳桿 3-乙酰-2,4-二甲基-5乙氧羰基吡咯異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K

少根根霉東京變種 (+)-1,4-二-O-芐基-D-蘇糖硫軟骨

類阿達青霉 Nα-苯甲酰-DL-精氨酰-β-萘阿立新B

膠孢 DiOC2(3) [3,3'-Diethyloxacarbocyanine Iodide]晶狀體蛋白αA

田菁根瘤 2-氟-3--5-CHO宿主蛋白

橙黃色擲孢酵母 (±)-BOC-A-膦酰基甘酯,95%鸚鵡衣原體抗體

嗜糖黃桿 二(2-吡啶甲)金克氏錐蟲抗體

皺褶假絲酵母 (S)-5-氧代四-3-芐酯β-羥基丁

托魯斯山鏈霉 2-Dicyclohexylphosphino-2′,4′,6′-triisopropylbiphe血管生成樣蛋白1

鏈卵屬 [2-(二叔丁基磷)二苯基]金谷脫羧2

腸沙門氏腸亞種波那雷恩血清型 1 - (4,4 - 二苯基-3 - 基)- 3 -鹽鹽卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白2

大腸埃希氏桿 2-(4-聯(lián)苯基)-5-苯基-1,3,4-噁二唑角蛋白6B

熒光假單胞 2-氨基-5-溴噻唑-4-甲甲酯磷核糖焦磷酰基轉(zhuǎn)移

稻平臍蠕孢 單丁基三異辛錫相關(guān)血漿蛋白A

北京擲孢酵母 2--D-苯樁蛋白2

 


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