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熒光標記抗體注意事項:
1)對熒光標記的抗體的稀釋,要保證抗體的蛋白有一定的濃度,一般稀釋度不應超過1:20。
2)染色的溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標本及抗原而變化,染色時間可以從10 min到數(shù)小時,一般30 min已足夠。
3)為了保證熒光染色的正確性,*試驗時需設置下述對照:
① 標本自發(fā)熒光對照:標本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS。
② 特異性對照(抑制試驗):標本加未標記的特異性抗體,再加熒光標記的特異性抗體。
③ 陽性對照:已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。
4)一般標本在高壓汞燈下照射超過3min,就有熒光減弱現(xiàn)象,經(jīng)熒光染色的標本應在當天觀察。
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