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大鼠elisa試劑盒原理:
采用競爭法測定金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL水平。用金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入標本及標準品,并加入HRP標記的OXLDL抗體,標本及標準品中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。反復洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。標本中抗體量越多,結合大鼠elisa試劑盒在固相上的酶標抗體愈少,顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的OXLDL含量呈負相關。采用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值),根據(jù)標準曲線,計算測試樣品中OXLDL濃度。
大鼠elisa試劑盒操作注意:
1.不同的試劑盒因工藝和操作方法略有不同,務必按照所用大鼠elisa試劑盒說明書嚴格操作,否則容易產(chǎn)生檢測結果的不確定性.
2.若不同批號大鼠elisa試劑盒的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進行交叉使用,有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。
3.反應時間的誤差,做大量標本時,一孔和后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
4.臨界值附近標本波動為正常現(xiàn)象,任何試劑均不可避免。可以考慮將標本做奇數(shù)次復檢。
5.加樣時樣品量誤差,對于陰或很陽的標本影響不大,但對閾值附近的標本影響,建議校對加樣器。
大鼠elisa試劑盒組成結構:
一、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱量和肉毒素的試管。收集血液后,1000*g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心的分離。
二、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
三、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
四、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
五、 保存:如果樣品不立即大鼠elisa試劑盒使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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