RIPA Buffer配制

時(shí)間：2021/12/21閱讀：1088

1. 基礎(chǔ)成分

Tris-HCl（緩沖液成分，防止蛋白變性）

NaCl（鹽份，防止非特異蛋白聚集）

NP-40（非離子去污劑，提取蛋白；用H2O配制成10%儲(chǔ)存液）

去氧膽酸鈉（離子去污劑，提取蛋白；用H2O配制成10%儲(chǔ)存液；避光保存）

注意：準(zhǔn)備激酶（致活酶）實(shí)驗(yàn)時(shí)，不要加去氧膽酸鈉，因?yàn)殡x子型去污劑能夠使酶變性，導(dǎo)致活性喪失。

2. RIPA蛋白酶抑制劑

苯甲ji 磺酰氟（PMSF）（用異丙醇配制成200 mM的儲(chǔ)存液，室溫保存）

EDTA（鈣螯合劑；用H2O配制成100 mM的儲(chǔ)存液，PH 7.4）

亮抑酶肽（Leupeptin）（用H2O配制成1 mg/ml的儲(chǔ)存液，分裝，-20℃保存）

抑蛋白酶肽（Aprotinin）（用H2O配制成1 mg/ml的儲(chǔ)存液，分裝，-20℃保存）

胃蛋bai 酶抑制劑（Pepstatin）（用甲醇配制成1 mg/ml的儲(chǔ)存液，分裝，-20℃保存）

3. RIPA磷酸（酯）酶抑制劑

激活的Na3VO4（用H2O配制成200 mM的儲(chǔ)存液

NaF（200 mM的儲(chǔ)存液，室溫保存）

注意：在準(zhǔn)備做磷酸（酯）酶實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，不加磷酸酯酶抑制劑。

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