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ATCC細胞采集及保存:
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
ATCC細胞操作方法
(1)取成年新西蘭大白兔,耳緣靜脈注射空氣處死后,取下兔子的雙腿,立即用75%乙醇浸泡。
(2)移入細胞房內,去除雙腿表面的皮毛及肌肉,剪取關節段,移至超菌工作臺內。
(3)PBS洗滌數次,用手術刀或彎剪將關節表面的軟骨組織取下。
(4)軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化15-20min;
(5) 4℃靜置5min;棄上清,PBS洗滌,去上清。加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化2H;
(6)加入生長培養基終止消化,反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM*培養基重新懸浮細胞, 放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
(7)細胞傳代后放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。細胞*展開后即可固定做原代鑒定。
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