【儀表網 儀表標準】《低溫乳制品中金黃色葡萄球菌檢驗 實時熒光PCR方法》團體標準已完成征求意見稿的編制，根據《團體標準管理規定》的要求，為保證標準的科學性、嚴謹性和可操作性，現在《全國團體標準信息平臺》面向社會各界公開征求意見。
本文件按照GB/T 1.1的編寫規則起草。參考GB 4789.1 食品安全國家標準 食品微生物檢驗總則；GB 4789.10 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗；GB 4789.28 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求；GB 19489 實驗室生物安全通用要求；GB/T 27403 實驗室質量控制規范 食品分子生物學檢驗等規程編制。
本文件規定了巴氏殺菌乳、高溫殺菌乳(低溫保存)、發酵乳、調制乳等低溫乳制品中金黃色葡萄 球菌的實時熒光 PCR 檢測法(商品化試劑盒方法)。本文件適用于巴氏殺菌乳、高溫殺菌乳(低溫保存)、發酵乳、調制乳等低溫乳制品中金黃色葡萄 球菌的快速初篩及鑒定。
儀器和設備：
除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外，其他設備如下: 恒溫培養箱:36 ℃±1 ℃；電子天平:感量 0.1 g；均質器(旋刀或拍擊式)或等效設備；pH 計或精密 pH 試紙:精密度 0.1；微量移液器及無菌帶濾芯吸頭；金屬浴:98 ℃ ± 1 ℃；掌式離心機；實時熒光定量 PCR 儀；低溫冰箱。
樣品制備及增菌培養：
將樣品平衡至室溫，無菌操作稱取25 g(mL)樣品，置于盛有225 mL 7.5%氯化鈉肉湯的無菌均質 袋或其他無菌容器中，若樣品是固態或半固態，用拍擊式均質器拍打1 min ~2 min混勻(或用旋轉式均 質器8000 rpm ~10000 rpm均質1 min ~2 min)；若樣品是液態，不需要均質，震蕩混勻即可。如使用均 質袋，可直接進行培養；如使用均質杯或其他容器，無菌操作將樣品轉移到其他培養容器。
結果判定；
質控系統：空白對照和陰性對照均未出現典型的擴增曲線或Ct值≥40，陽性對照出現典型的擴增曲 線并且Ct值<30，且上述對照HEX通道出現典型的擴增曲線并且Ct值<40，則檢測系統正常。否則，任 一種對照出現非上述正常結果，應重做實驗，同時排除污染。
檢測系統正常的情況下，檢測樣品Ct值≤35時，判定PCR結果為陽性；當35<檢測樣品Ct值<40時， 重復檢測一次，如果Ct值<40并且曲線有明顯的對數增長期，判定PCR結果為陽性，否則判定PCR結果 為陰性；當Ct值≥40或無Ct值時，判定PCR結果為陰性。
如果PCR結果為陰性，且HEX通道擴增曲線正常，則直接報告陰性結果；如果PCR結果為陰性，且 HEX通道擴增曲線Ct值≥40，則直接報告本次檢測無效；如果PCR結果為陽性，則需要根據7.4進行確證實驗。
結果與報告：
根據PCR檢測結果及確證實驗結果，報告25g(mL)樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。
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