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小鼠白介素4 Mouse(IL-4)ELISA試劑盒售后服務

時間:2017-3-27閱讀:178
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進口原裝elisa試劑盒用純化的IL-4抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的IL-4抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的IL-4呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(值),計算樣品濃度。
小鼠白介素4 Mouse(IL-4)ELISA試劑盒操作步驟
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫,試劑不能直接在37溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。
1、 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ,余孔分別加標準品或待測樣品100,注意不要有氣泡,加樣 時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37溫育2小時。為保證實驗結果有效
性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2、 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100(臨用前配制),酶標板加上覆膜,37溫育1小時。
3、 棄去孔內液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
4、 每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100,加上覆膜,37溫育1小時。
5、 棄去孔內液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90,酶標板加上覆膜37避光顯色(反應時間控制在15-30分鐘,當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。
7、 進口原裝elisa試劑盒每孔加終止溶液50,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。
8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(值)。
 
小鼠白介素4 Mouse(IL-4)ELISA試劑盒注意事項
1、 試劑準備:所有試劑在使用前應平衡至室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2、 加樣:加樣或加試劑時,*個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內。推薦設置復孔進行實驗。
3、 溫育:為防止樣品蒸發,實驗時將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
4、 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。
5、 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配制使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請 配制標準品及工作液,盡量不要微量配制(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10),以避免由于不準確稀  釋而造成濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液。
6、 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7、 進口原裝elisa試劑盒底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
     
 

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