碧云天生產(chǎn)的植植物原生質(zhì)體分離試劑盒(Plant Protoplasts Isolation Kit)，是一種能夠簡(jiǎn)單、快捷地通過(guò)酶學(xué)方法消化植物尤其是擬南芥(Arabidopsis thaliana)細(xì)胞壁中的纖維素并釋放出大量且具有生物活性的原生質(zhì)體的試劑盒。使用本試劑盒分離出的原生質(zhì)體可用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染以及原生質(zhì)體融合等實(shí)驗(yàn)研究。

植物原生質(zhì)體是指去除掉細(xì)胞壁后由細(xì)胞膜包被的具有生命活力的植物細(xì)胞體。植物細(xì)胞壁的主要成分為纖維素(cellulose)，半纖維素(hemicellulose)和果膠(pectin)等。植物細(xì)胞壁組分被適當(dāng)?shù)拿赶到夂螅湍茚尫懦鰺o(wú)細(xì)胞壁包被的植物原生質(zhì)體。原生質(zhì)體是開展一系列植物細(xì)胞研究的重要材料，可以用于短時(shí)間基因表達(dá)(transient gene expression)、病毒感染(viral transfection)、體細(xì)胞雜交(somatic hybridization)、電生理研究(electrophysiological study)和形態(tài)學(xué)研究(morphological study)等，從而在植物亞細(xì)胞定位(subcellular localization)、蛋白活性分析以及蛋白與蛋白相互作用(protein-protein interaction)等研究方面發(fā)揮重要作用。

使用本試劑盒處理擬南芥葉片所獲得的原生質(zhì)體效果圖(圖1)：

圖1. 碧云天生產(chǎn)的植物原生質(zhì)體分離試劑盒(Plant Protoplasts Isolation Kit)分離制備的擬南芥原生質(zhì)體效果圖。酶解體系配制(5ml)：稱取0.095g Enzyme Mix，加入2.5ml 2X Digest Buffer，55℃水浴10min使酶充分溶解，冷卻至室溫后，分別加入100μl Digest Solution I，10μl Digest Solution II和50μl Digest Solution III，加無(wú)菌水定容至5ml，輕輕混勻并溶解后，用0.45μm針頭濾器(FF365)過(guò)濾。生長(zhǎng)狀態(tài)良好的擬南芥葉片20片，去除葉片的基部，用刀片(FS205)切成0.5-1mm小條，浸入細(xì)胞壁消化液中，真空干燥器抽真空30min，避光條件下消化3h后，輕輕搖動(dòng)并吸取少量消化液在光學(xué)顯微鏡下觀察游離的原生質(zhì)體(圖A)。消化比較充分后，將所得原生質(zhì)體溶液用1X Dilution Buffer進(jìn)行等體積稀釋，再用70μm孔徑的細(xì)胞過(guò)濾器(FSTR070)過(guò)濾所獲得的原生質(zhì)體溶液，以去除未消化葉片，室溫下100g離心1min，去除上清，將其重懸于500μl Resuspension Buffer中，吸取100μl重懸的原生質(zhì)體，光學(xué)顯微鏡下觀察原生質(zhì)體的數(shù)量與形態(tài)(圖B)。實(shí)際的檢測(cè)效果會(huì)因檢測(cè)條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

按照每次使用5ml細(xì)胞壁酶消化體系計(jì)算，本試劑盒可用于20次細(xì)胞壁酶消化反應(yīng)。本試劑盒每個(gè)5ml反應(yīng)體系可處理0.1g左右的擬南芥葉片(約10~15葉片)，操作較好的情況下每5ml體系可獲得約50-70萬(wàn)個(gè)原生質(zhì)體(不同植物不同操作會(huì)有一定的差異)，可滿足約25-100個(gè)樣品的原生質(zhì)體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染操作(按照每樣1-2萬(wàn)個(gè)細(xì)胞計(jì)算)。

-20℃保存，至少一年有效。C0362S-2 Enzyme Mix可長(zhǎng)期4℃保存，其余組分4℃存放數(shù)天不會(huì)影響使用效果。數(shù)天內(nèi)連續(xù)使用的情況，可以全部保存在4℃。

細(xì)胞壁消化液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，不能配制后凍存用于后續(xù)用途。

請(qǐng)按照試劑盒要求的保存條件存放相關(guān)試劑，使用時(shí)請(qǐng)將各溶液充分融解并混勻，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融。

2X Digest Buffer (C0362S-1)以及Resuspension Buffer (C0362S-7)容易被微生物污染，使用時(shí)須嚴(yán)格按照無(wú)菌操作規(guī)范進(jìn)行或者適當(dāng)分裝后使用。

所制備的原生質(zhì)體如果后續(xù)需要用于轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)等相對(duì)較長(zhǎng)時(shí)間的用途，所有操作都必須按照無(wú)菌操作規(guī)范進(jìn)行。

需使用者自備的實(shí)驗(yàn)儀器與耗材：水浴鍋(E0530)，0.45μm針頭濾器(FF365)，手術(shù)刀片(FS205)，平頭鑷子(FS035)，70μm細(xì)胞過(guò)濾器(FSTR070)以及離心管等其它耗材。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

植物原生質(zhì)體分離試劑盒