天根TIANScriptⅡcDNA試劑盒-qpcr試劑盒-逆轉錄試劑盒-KR107

產品簡介：

本試劑盒提供了所有的用于cDNA鏈合成的試劑，其中的TIANScriptⅡRTase為改良后的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MLV），改良后的新RTase具有更高的模板親和力和更低的RNase H活性，因此使其在cDNA條鏈的合成過程中具有通讀復雜二級結構模板和反轉錄長片段cDNA的能力。產品中配備的5×TIANScriptⅡRTase Buffer經過精心的優化，既保證了新型RTase的高效酶活，又拓寬了RNA模板量的加入范圍，使得反轉錄出來的cDNA利于后續的實驗分析。

■ 酶活效率高：效率高的反轉錄酶活性，后續實驗兼容性好。

■ 底物范圍廣：適用于所有RNA，尤其是具有復雜二級結構的RNA 模板。

■ 反轉片段長：cDNA 鏈合成可以達到12 kb。

■ 操作簡單：只需一步添加所需成分，無需中間加入其他試劑。

天根TIANScriptⅡcDNA試劑盒適用范圍：

1. cDNA鏈的合成；

2. cDNA文庫的構建；

3. 一步法RT-PCR；

4. RACE分析。

實驗步驟：

注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。

1. 用于cDNA合成反應的溶液試劑盡可能用DEPC進行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時，用經過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行濾除菌處理。

2. RNA樣品要避免基因組DNA污染；

3. 避免反復凍融RNA，使RNA保持在冰浴中處融化狀態；

4. 試劑盒中各組分成分應在-20℃保存；

5. 在使用Random Primer時，要注意隨機引物量和總RNA量之間的關系，一般建議50 ng隨機引物/5 ug總RNA。當提高Random/RNA的比率將會提高短片段（～500 bp）cDNA的合成；而當降低Random/RNA的比率將會提高長片段cDNA的合成；

6. 如果模板RNA富含二級結構，可以先在65℃條件下處理5min；

7. 如果反轉錄中使用PCR下游引物，為了防止引物錯配導致的非特異擴增，可以在50℃條件下進行反轉錄；

8. 在進行長片段擴增時，為了防止cDNA結果被破壞，建議以70℃下處理15 min為酶滅活條件；

9. 當使用酶類時，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部，由于酶粘度高，吸取時應慢慢吸取。

注意：如果要擴增長片段，需使用新鮮提取所得的完整性好、純度高的RNA。

儲存條件

本產品中的各成分可在-20℃條件下保存1年。