特點優勢:
1. 特異性:所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐
的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
參數規格:
產品名稱:登革病毒3型檢測試劑盒(熒光PCR法)
產品貨號:YS-P013982
產品規格:50T
產品分類:PCR檢測試劑盒
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.公司產品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
雞維酸受體α(RARα)Alexa Fluor 488標記的小鼠抗人IgG
雞補體片段3b(C3b) Alexa Fluor 555標記的小鼠抗人IgG
雞鈣非依賴性磷脂酶A2(iPLA2)PE-Cy3標記的小鼠抗人IgG
雞核質蛋白22(NMP-22)PE-CY5標記的小鼠抗人IgG
雞結締組織生長因子(CTGF) APC標記的小鼠抗人IgG
雞狀腺激素反應因(THRSP)Cy3標記的小鼠抗人IgG
雞脂肪酸結合蛋白3(FABP3)Cy5標記的小鼠抗人IgG
雞C型鈉尿肽(CNP) Cy5.5標記的小鼠抗人IgG
雞熱休克蛋白20(HSPβ6/HSP-20) Cy7標記的小鼠抗人IgG
雞轉錄因子20(TCF20)羅丹明標記的小鼠抗人IgM
雞協同激分子受體(CMR) 生物素標記的小鼠抗人IgM
雞環腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH/CD38)辣根過氧化物酶標記的小鼠抗人IgM
雞鈣聯蛋白(CNX) FITC標記的小鼠抗人IgM
雞堿性唾液脯氨酸豐富蛋白2(PRB2) Cy3標記的小鼠抗人IgM
雞周期素B(CCNB) Cy5標記的小鼠抗人IgM
雞原纖維蛋白1(FBN1)Cy5.5標記的小鼠抗人IgM
登革病毒3型檢測試劑盒(熒光PCR法)CD4/Biotin 生物素化CD4抗體IgGFmoc-D-4-氨酸 96%
Integrin AlphaV Beta1/Biotin 生物素化兔抗人、大、小鼠整合素αVβ1抗體IgGFmoc-對硝-L-氨酸 98%
Integrin alpha V/CD51 /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠等整合素αV抗體IgGFmoc-D-4-氨酸 98%
VDAC/FITC 熒光素標記電壓依賴性陰離子通道抗體IgGFmoc-3-硝-L-酪氨酸 98%
CD14/Biotin 生物素化CD14抗體IgGN-(9-芴氧羰)-S-三-D-青霉 ≥98.5%
human Rabies virus IgG/Biotin 人狂犬病免疫球蛋白抗體Fmoc-2-氨酸 97%
VDCC-L alpha/FITC 熒光素標記L-型電壓依賴型鈣通道α抗體IgGFMOC-D-α-甘氨酸 98%
VDCC-L Beta/FITC 熒光素標記L-型電壓依賴型鈣通道β抗體IgGFMOC-甘氨酸 ≥98.5%