產(chǎn)品介紹:
英文名稱:checkpoint kinase inhibitor 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg AZD-7762是一種有效的ATP競爭性的細胞周期檢測點激酶(checkpoint kinase,Chk)抑制劑,抑制Chk1,IC50為5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:860352-01-8 純度:98.68% 分子式:C??H??FN?O?S 分子量:362.42 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
英文名稱:checkpoint kinase inhibitor
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10511
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
多帶革孔菌跨膜蛋白16A/鈣激活離子通道抗體Anti-HSD17B1 Antibody唾液轉(zhuǎn)移8D(SIAT8D)
卡爾斯伯酵母腫瘤壞死因子-α抗體Anti-HSD17B10 Antibody唾液轉(zhuǎn)移8C(SIAT8C)
紋黑蛋巢菌腫瘤蛋白P53誘導蛋白11抗體Anti-HSD17B1 Antibody唾液轉(zhuǎn)移8B(SIAT8B)
葡萄球菌屬味覺2型受體蛋白家族49抗體Anti-HSD17B2 Antibody唾液轉(zhuǎn)移8(SIAT8)
糞腸球菌早期未分化視網(wǎng)膜及晶狀體蛋白EURL抗體Anti-HSD17B2 Antibody唾液轉(zhuǎn)移7F(SIAT7F)
勝利油田鹽單胞菌特異激底物蛋白抗體Anti-HSD17B4 Antibody唾液轉(zhuǎn)移7E(SIAT7E)
脊孢糖多孢菌微管相關(guān)同源蛋白TPX2抗體Anti-HSD17B4 Antibody唾液轉(zhuǎn)移7D(SIAT7D)
毛栓菌神經(jīng)死亡誘導蛋白激抗體Anti-HSD17B6 Antibody唾液轉(zhuǎn)移7C(SIAT7C)
秦氏蜜環(huán)菌微管蛋白β tubulin抗體 Tubulin βAnti-HSF1 Antibody唾液轉(zhuǎn)移7B(SIAT7B)
草生毛霉轉(zhuǎn)化性卷曲含蛋白質(zhì)2Anti-HSD3B1 Antibody唾液轉(zhuǎn)移7A(SIAT7A)
芽孢桿菌屬小鼠抗促甲狀腺抗體Anti-HSF2 Antibody唾液轉(zhuǎn)移4C(SIAT4C)
龍舌蘭盤孢腦源性tau蛋白激抗體Anti-HSF2 Antibody唾液轉(zhuǎn)移4B(SIAT4B)
鏈孢囊菌破傷風重鏈抗體Anti-HSF4 Antibody唾液轉(zhuǎn)移4A(SIAT4A)
黑曲霉基移換樣蛋白1抗體Anti-Hsp70/HSPA1A/HSPA1B Antibody唾液轉(zhuǎn)移1(SIAT1)
玫瑰暗黃鏈霉菌膜型絲蛋白2抗體Anti-HSP90AA1 Antibody唾液乙酰酯(SIAE)
地中海中慢生根瘤菌*抑癌蛋白TCHP抗體Anti-HSP90AA1 Antibody唾液4(SIAL4)
跨膜蛋白SEMA4F抗體異常漢遜酵母異常變種人脈絡(luò)膜血管平滑肌細胞
跨膜蛋白SEMA4G抗體異常威克漢姆酵母人晶狀體上皮細胞
軸突導向因子SEMA3E抗體死亡谷芽孢桿菌人視網(wǎng)膜色上皮細胞
跨膜蛋白SEMA5A抗體梭狀芽孢桿菌人胎兒真皮成纖維細胞
細胞周期檢測點激酶抑制劑(AZD-7762)運動發(fā)酵單孢 D-半乳糖烯痘病
赤褐鵝膏 2-乙酰基-6-甲氧基吡啶B病
食用油 B 1 異噁唑-5-甲逆轉(zhuǎn)錄病
樟疫霉 FMOC-L-2-缺陷病
桔梅奇酵母 FMOC-L-3-T趨向性病1型
蘇云金芽胞桿蠟螟亞種 L-谷-15N尿
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 脒基硫脲結(jié)核
熒光假單胞 1,5-萘二磺,四水肌鈣蛋白T
嗜松青霉 3-溴聯(lián)苯心肌特異性肌鈣蛋白T
短小芽孢桿 2-聯(lián)苯牛血清白蛋白
鍺栓孔 二乙基二硫代白介18
粗糙脈孢 α-羥基異丁甲酯B皰疹病抗體
毛球馬勃屬 4-(Boc-氨基)-3-吡啶B皰疹病抗原
蠟狀芽孢桿 4-三氟甲硫基芐溴胰高血糖
宇佐美曲霉B1變種 3,3'-二羥基二苯二硫胰島