Hi T7 RNA Polymerase

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商品介紹：

對 T7 噬菌體啟動子具有高度的特異性，并可以其作為啟動子，DNA 作為模板體外合成正義鏈。雙鏈線性質粒 DNA、PCR 產物均可作為該酶的底物模板。Hi T7 RNA 聚合酶經電子重構架及庫篩選，與 Wild型比較來看，酶的 DNA 模板結合區域親和力更高，使其具有持續合成能力，從而獲得更高的產量，并易于長片段RNA 的合成。該酶為重組純化制品，無 DNase 和 RNase污染。

活性定義：在標準反應體系下，37℃ 1 小時內將 1 nmol的 ATP 摻入酸不溶物所需要的酶量定義為一個活性單位。
儲存：置于-20°C 可保存 2 年，如有白色沉淀析出，37°C溫浴 5min 后使用，不影響性能。
熱失活：75°C，10min。

2. 37℃孵育 2-3h (通常 3h，即可獲得>80 μg 的總產量)。
3. 反應完畢后，如需去除模板 DNA，加入 Dnase I（2U）37℃處理 15min。
4. 終止反應：75℃加熱 10min，或加入 2 μl 0.5M 的 EDTA(pH8.0)。
注意事項
1.質粒DNA的質量影響RNA的量和完整性。質粒DNA的濃度越高，生成RNA的質量越高，質粒模板DNA應該無RNase污染.
2.該酶為高產酶，RNA 產量高，在反應完畢后，通常存在肉眼可見的渾濁狀態，其為反應副產物焦磷酸鎂，此時表明反應劇烈。在下一步 RNA 純化前，可通過短暫離心去除沉淀物，此過程并不丟失 RNA。
3. 通常轉錄后 RNA 產物濃度在 2-4 μg/μl，因此電泳時，僅需取 0.05-0.1 μl 即可。

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