Super ECL Substrate

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商品介紹：

超敏 ECL 顯色液用于 Western、Northern 和 Southernblot 分子雜交的化學發(fā)光檢測，比傳統(tǒng)化學顯色法靈敏度高，可達 pg 水平。原理是采用新型發(fā)光底物（Luminol），其與辣根過氧化物酶反應時產(chǎn)生很強的發(fā)光信號，在暗室中對X-光片感光，以此檢測微量蛋白而獲得理想的實驗結(jié)果。海基增強型 ECL 顯色液具有靈敏度高，持續(xù)時間長等特點。

應用
在 Western 印跡分析，核酸雜交以及 EMSA 實驗中，HRP標記的二抗或探針與靶分子結(jié)合再與底物反應產(chǎn)生可見光。
儲存：2-8°C，Super ECL A 要求避光保存。
操作方法（以 Western Blot 為例)
1．按每平方厘米膜面積用 0.1-0.2 ml 配置顯色液：根據(jù)顯色液的需要量，取等體積 A 液和 B 液，混勻后避光保存?zhèn)溆茫辉擄@色液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
2．2. 取出膜，平放在干凈的保鮮膜上，膜的正面（蛋白質(zhì)面）朝上，在膜的中央加適量的配置好的顯色液（6×8 cm 的膜加 2 ml 顯色液），溶液向四周迅速擴散，覆蓋所有膜面。室溫保溫 5 分鐘左右，在此過程中請仔細觀察信號的出現(xiàn)。注意：如果信號強，在暗室中能很快看到陽性信號出現(xiàn)。
3．3. 待信號出現(xiàn)且穩(wěn)定后，用鑷子夾起膜，除去多余的顯色液，平放在干凈的保鮮膜上，膜的正面（蛋白質(zhì)面）朝上，在轉(zhuǎn)移膜的上面再覆蓋一層保鮮膜，除去保鮮膜與轉(zhuǎn)移膜之間的空氣泡，請務必保證保鮮膜是干凈的，不被其他雜物或液體污染。
4．4. 在暗室中，將膜的正面對著 X-光片，放入暗盒。第一次曝光時間在 1 分鐘左右(有經(jīng)驗的操作者可以根據(jù)信號的強弱自行決定)，立即按要求對 X-光片進行顯影和定影，確定最佳曝光時間。曝光時間從數(shù)秒到數(shù)小時不等；特別弱的過夜曝光也可。
注意
1.PVDF 膜較硝酸纖維膜能更好的結(jié)合蛋白，因此呈現(xiàn)較強的信號。選高質(zhì)量的 PVDF 膜；盡可能不用 Nylon 膜。
2.2.與抗體結(jié)合以后，要保證膜處于濕潤狀態(tài)，否則會導致背景較高。
3.3.沒有信號的原因：有些抗體不識別變性抗原，有時需要考慮電泳過程對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響；樣品中無待測蛋白質(zhì)或含量過低；一抗效價低，用量少，可適當增加一抗的用量；
4.4.背景過高原因：轉(zhuǎn)移膜封閉不充分；與抗體孵育后洗滌；膜在處理過程中過干；二抗用量過多等。
5.5.注意及時更換顯影液、定影液。
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