使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆GU262探針法qPCR試劑盒
貨號:CP96975
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆GU262探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human POTE-E(POTE-E(POTE Ankyrin Domain Family Member E)) ELISA Kit資源名稱鴨疫里氏桿菌種屬:Riemerella│anatipestifer分離基物:鴨心血

Human FDP(Fibrinogen Degradation Product) ELISA Kit資源名稱乳房鏈球菌種屬:Streptococcus│uberis分離基物:患病奶牛

Human POTE-D(POTE-D(POTE Ankyrin Domain Family Member D)) ELISA Kit資源名稱氏桿菌種屬:Pasteuerlla│gallinarum分離基物:水牛

Human FETUB(Fetuin B) ELISA Kit資源名稱牛溶血鏈球菌種屬:Streptococcus│bovis分離基物:牛

Human fFDFT1(Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit資源名稱山羊葡萄球菌種屬:Staphylococcus│caprae分離基物:羊

Human FG(Fibrinogen) ELISA Kit資源名稱豬葡萄球菌種屬:Staphylococcus│hyicus分離基物:豬心

Human FGF23(Fibroblast Growth Factor 23) ELISA Kit資源名稱非洲馬瘟病毒（VI型）種屬:類戊肝病毒屬│提供形式:凍干物

Human FGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit資源名稱非洲馬瘟病毒（IX型）種屬:類戊肝病毒屬│提供形式:凍干物

Human FGFR3(Fibroblast Growth Factor Receptor 3) ELISA Kit資源名稱流產(chǎn)布魯氏菌 生物Ⅵ型種屬:Brucella│abortus BiovarⅥ提供形式:凍干物

Human FGFR4(Fibroblast Growth Factor Receptor 4) ELISA Kit資源名稱Alternaria angustiovoidea種屬:Alternaria│angustiovoidea分離基物:莖

Human FGL1(Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit資源名稱Amycolatopsis keratiniphila subsp. nogabecina種屬:Amycolatopsis│keratiniphila subsp. nogabecina提供形式:凍干物

Human FGL2(Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit資源名稱Chlamydomyces palmarum種屬:Chlamydomyces│palmarum分離基物:根

Human FGα(Fibrinogen Alpha) ELISA Kit資源名稱Mycetocola reblochoni種屬:Mycetocola│reblochoni提供形式:凍干物

Human FGβ(Fibrinogen Beta) ELISA Kit資源名稱Myrmecridium sp.種屬:Myrmecridium│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human f-Hb(Free Haemoglobin) ELISA Kit資源名稱Pestalotiopsis cocculi種屬:Pestalotiopsis│cocculi分離基物:根

Human FLNα(Filamin A, Alpha) ELISA Kit資源名稱Tritirachium roseum種屬:Tritirachium│roseum分離基物:土壤

Human FLOT2(Flotillin 2) ELISA Kit資源名稱暗灰色馬杜拉放線菌種屬:Actinomadura│atramentaria提供形式:凍干物

Human Flt3L(FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit資源名稱棒狀鏈霉菌種屬:Streptomyces│clavuligerus提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human FOXC1(Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit資源名稱北里孢菌屬種屬:Kiatasatospora│griseola提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human ITG αⅤβ3(Integrin αⅤβ3) ELISA Kit資源名稱草色串孢種屬:Torula│herbarum分離基物:植物殘體
轉(zhuǎn)基因品系大豆GU262探針法qPCR試劑盒CTAG| CTAG1| ESO1| LAGE2| LAGE2A| Cancer/testis antigen 6.1| L antigen family member 2形態(tài)特性  上皮細胞生長特性 貼壁生長特征特性  CSAp陰性(CSAp-)。 結(jié)腸抗原3，陰性。 角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 癌基因c-myc, K-ras, H-ras, myb, sis 和fos的表達呈陽性。 未檢測到癌基因N-myc和N-ras的表達。 表達腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白CC-4，CC-5和CC-６。 培養(yǎng)條件  L15: Leibovitz Medium  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

HSP-40(Heat Shock Protein 40)|DNAJB1|Hdj1|HSPF1|DnaJ(Hsp40) homolog|subfamily B|member 1|dnaJ homolog subfamily B member 1|DnaJ protein homolog 1|DNAJ1|hDj-1|Heat shock 40 kDa protein 1|HSP40|Human DnaJ protein 1|radial spoke 16 homolog B|RSPH16B|Sis1形態(tài)特性  上皮細胞生長特性 貼壁生長特征特性  C-33 A 細胞株是N. Auersperg從宮切片中建立的一系列細胞株(參見ATCC CRL-1594和ATCC CRL-1595)中的一株。 細胞一開始就表現(xiàn)出亞二倍體核型及上皮細胞形態(tài)。 連續(xù)傳代可以觀察到核型不穩(wěn)定。 存在成視網(wǎng)膜細胞瘤蛋白(pRB)，但大小不正常。 P53表達上調(diào)，且有一個273位密碼子的點突變導致Arg -> Cys的替換。 人瘤病毒DNA及RNA陰性。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

OGFR| opioid growth factor receptor|Protein 7 60| Zeta type opioid receptor形態(tài)特性  上皮細胞生長特性 貼壁生長特征特性  這株細胞來源于一個細胞集落不規(guī)則沒有顯著角質(zhì)化的侵染性鱗狀細胞癌。 單層培養(yǎng)的細胞間可以觀察到帶狀連接，也注意到有細胞質(zhì)張力絲。 1970年發(fā)現(xiàn)支原體污染并去除。 腫瘤壞死因子(TNF)α抑制ME-180的生長。 這株細胞含有人瘤病毒(HPV)DNA，與HPV-39的同源性高于HPV-18。 培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

CALCB(Calcitonin gene-related peptide 2)|CALC2|Beta-CGRP|CGRP-II|Beta-type CGRP|Calcitonin gene-related peptide II形態(tài)特性  上皮細胞生長特性 貼壁生長特征特性  這株細胞是J. Sykes于1974年建立的（參考ATCC HTB-33）。 有報告稱MS751細胞含有人狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。 [22995] [23180] 后來發(fā)現(xiàn)MS751細胞包含HPV-45基因組的一部分，而其中E6/E7區(qū)域表達呈poly(A)+RNA的形式。 [49721] 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

AMY||NOEL1|Noelin|NOELIN1|OlfA|olfactomedin 1|OLFM1形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  人肝膽管癌細胞。據(jù)說產(chǎn)CEA和CA19-9。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

BHLHB1| bHLHe19| OLIG2| OLIGO2| PRKCBP2| RACK17形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  據(jù)報道產(chǎn)球蛋白和甲胎蛋白。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

INSR|CD220|CD220 antigen|HHF5|insulin receptor|IR形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  人肝癌細胞株。這株細胞從裸鼠體外移植瘤中建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

HABP1|C1QBP(Hyaluronan Binding Protein 1)|gC1qBP|gC1qR|SF2p32|p32|Glycoprotein gC1qBP|HABP1p33|GC1q-R protein|C1q globular domain-binding protein|gC1Q-R|Hyaluronan-binding protein 1|Mitochondrial matrix protein p32|splicing factor SF2-associated protein形態(tài)特性  上皮細胞生長特性 貼壁生長特征特性  SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到。 此細胞對腫瘤壞死因子和幾種細胞毒性藥物包括白喉毒素、順鉑和阿霉素均耐受。 在裸鼠中致瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。 培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%