細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
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產品名稱 | 肺鱗癌細胞：NCI-H520 |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0400 |
商品介紹：
名稱 肺鱗癌細胞：NCI-H520 別稱H520; H-520; NCI-HUT-520; NCIH520 種屬人類 年齡（性別）不詳 組織來源肺 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述NCI-H520細胞是由Gazdar AF等在1982年建系而來，源于鱗狀細胞肺癌組織；NCI-H520細胞p53 mRNA表達水平較正常肺組織低，但是沒有大的結構DNA的異常。NCI-H520細胞角蛋白、波形蛋白陽性，神經絲三聯蛋白陰性；NCI-H520細胞在軟瓊脂中可形成克隆。 生物安全等級1 生長培養基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~32-60小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5)). |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；
4) 待細胞*貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。
培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 TGF-beta 1 / TGFB1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 CD40 / TNFRSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 NRG1-alpha (ECD) 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 FAM3D / Oit1 人細胞裂解液 (陽性對照)
肺鱗癌細胞：NCI-H520 50T 脊髓灰質炎病毒3型PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
2 ug pMAL- c2x pMAL- c2x 低溫運輸，-20℃保存
IRS-2 胰島素受體底物-2抗體 規格: 0.2mlAE2/SLC4A2 陰離子交換蛋白2抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗豚鼠IgG 規格: 0.1ml
Beta galactosidase β半糖苷抗體 0.2ml
C17orf64 17號染色體開放閱讀框64抗體 規格: 0.2ml
Runx3 Runx3抗體 規格: 0.1mlARHGAP32 Rho GTP激活蛋白32抗體 規格: 0.2ml
Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的小鼠抗兔IgM 規格: 0.1ml
GDF8 生分化因子8/肌肉抑制素抗體 0.2ml
CHMP1B 染色質修飾蛋白1B抗體 規格: 0.2ml
C4orf22 4號染色體開放閱讀框22抗體 規格: 0.2ml
50T 兔出血癥病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
